動物細胞多數需要微堿性環境，pH約為7.2~7.4，以不超出6.8~7.6范圍為宜。緩沖系統對于維持培養基的pH是至關重要的，動物培養基的pH是通過模擬血漿中天然存在的

    CO2/NaHCO3（實際是CO32-/HCO3-）系統來控制的。配置動物培養基時，會將NaHCO3作為等滲溶液的一部分添加到培養基。

     一方面，由于NaHCO3不穩定，易分解產CO2，CO2從培養液中游離到空氣中，會使培養液pH升高；另一方面，細胞呼吸產生的CO2以及代謝產生的酸性代謝產物，又使pH降低。

       在培養開始的一段時間，細胞較少，呼吸產生的CO2較少，前者作用大于后者，培養液中pH可能會明顯上升，這就需要培養箱中補充一定量的CO2來維持pH；而后期隨著細胞數目增多，細胞產生CO2增加，后者作用便大于前者，此時，培養基中pH可能會明顯降低，盡管大多動物細胞耐酸能力比耐堿能力略強一些，但如果超過警戒值，則需要更換培養基進行傳代。

     培養液中一般加入酚紅作為pH指示劑，所以此培養基中顏色變化是：櫻桃紅色→粉紅色→黃色。如果使用培養基之前，先通入CO2，或在CO2培養箱內進行開放式培養，則培養基顏色變化是：櫻桃紅色→黃色。如果培養基變黃，則需要及時更換培養基。

    培養箱中CO2濃度應與培養液中NaHCO3濃度相平衡，如果培養箱中CO2濃度設定在5%，培養液中NaHCO3的加入量應為1.97 g/L；如果CO2濃度維持在10%，則NaHCO3的加入量應為3.95 g/L。

     動物細胞對pH變化比較敏感，但植物細胞就沒那么嬌弱了，培養過程中pH的變化幅度只要別太大，對它并不會造成明顯損傷。